No Image

Риф это в медицине

СОДЕРЖАНИЕ
10 просмотров
17 ноября 2019

Иммунофлуоресцентный анализ (МФА — метод флуоресцирующих антител, иммунофлуоресценция) (англ. Immunofluorescence ) — набор иммунологических методов для качественного и количественного определения поверхностных и внутриклеточных антигенов в образцах клеточных суспензий (культур клеток, бактерий, микоплазм, риккетсий, вирусов), образцов крови, костного мозга, альвеолярных смывов, тонких тканевых срезов. Метод позволяет детально анализировать биологические образцы на присутствие определенных антигенных детерминант, характерных для определенных возбудителей или заболеваний, проводить количественную оценку как поверхностных так и внутриклеточных белков и рецепторов. Исследование и оценка может выполняться вручную при помощи флюоресцентного микроскопа или автоматизировано с использованием проточного цитометра (flow cytometer) или микрочипового цитометра (сhip cytometer). Возможно применение конфокального микроскопа и роботизированного флюоресцентного микроскопа (в том числе совмещенных с проточным цитометром) в сочетании с программной системой обработки изображений. Имеющиеся в настоящее время автоматизированные технологии позволяют анализировать в одном образце примерно 50 различных антигенов с использованием набора различных флюоресцентных маркеров в формате высокоинформативной микроскопии и цитометрии (методы носят названия high-content imaging, high-content cytometry, high-content screening) и примерно вдвое меньшем максимальным набором антигенов с использованием современной проточной цитометрии или конфокальной микроскопии. Основными практическими приложениями являются онкология, микробиология, клеточная биология, генетика, фармакология и др.

Сущность и классификация метода [ править | править код ]

Сущность метода заключается в визуализации антигена специфическими антителами с флуоресцентными маркерами. Метод конъюгации глобулинов с органическими флюорохромами разработан в 1942 году А. Кунсом (англ.) русск. . [1] В настоящее время метод использует как антитела к различным антигенам, так и специфические красители к ДНК (к примеру DAPI), РНК (к примеру Sybr Green II), липидам и белкам.

В базовой МФА методике различают прямой метод, разработанный А. Кунсом и Мелвином Капланом, [2] и непрямой, разработанный А. Кунсом и Уиллером в первоначальном варианте непрямого МФА с комплементом.

При прямом методе (пМФА) на исследуемый препарат или в суспензию клеток наносят раствор прямо меченых флюоресцентным красителем антител. Образование комплекса антиген-антитело обнаруживается флюоресцентным сигналом в виде свечения разной степени интенсивности и четкости.

При непрямом методе (нМФА) на препарат наносят антитела против искомых антигенов (т. н. «первые» антитела), а затем видоспецифичные «вторые» антитела против «первых» антител, что позволяет избежать неспецифических реакций. При этом только вторые антитела коньюгированны с флюоресцентным красителем. К примеру, если при исследовании в качестве «первых» антител используются мышиные антитела — mouse IgG, то в качестве «вторых» используются антивидовые anti-mouse IgG коньюгированные с флюоресцентным красителем. Комплекс антиген-антитело дает флюоресцентное окрашивание только после связывания со «вторым» антителом.

Читайте также:  Кровотечение после гсг

Непрямые методы требуют наличия только антиглобулиновых видовых сывороток с флюорохромами, но при этом необходимо большое количество тестовых контролей. При постановке прямым методом делается только один контроль, хотя в более ранних версиях метода требовалось множество моноспецифических сывороток. Долгое время недостатками прямых видов МФА являлись ограниченная чувствительность из-за наличия возможных перекрестных реакций между близкими по антигенному составу объектами и неспецифическая флуоресценция вследствие адсорбции флуоресцирующих глобулинов на различных элементах препарата. В настоящее время используются коммерческие стандартные конъюгаты, содержащие иммуноглобулины к исследуемым антигенам. Использование биоинженерных иммуноглобулинов и высокая степень очистки антител позволили практически свести на нет неспецифические реакции, что сделало возможным дальнейшее технологическое развитие метода.

Поскольку прямой метод в настоящее время позволяет избежать неспецифических реакций, автоматизированные методики преимущественно используют прямой метод иммунофлуоресценции.

Результаты ручной микроскопической оценки описываются в так называемых «крестах» (от одного + до четырёх ++++) — субъективная градация степени выраженности реакции глазом исследователя. В автоматизированных методах в качестве детектора используются фотоумножители или высокочувствительные флуоресцентные фотокамеры, что позволяет регистрировать сигнал с большой точностью и дает значение относительного уровня флюоресценции (relative fluorescence ratio) в широком диапазоне шкалы. Абсолютное значение высчитывается с помощью контролей или антигенов с известным постоянным содержанием в образце. При использовании автоматизированных методов обработка данных осуществляется специализированными программами для обработки изображений и анализа цитометрических данных.

Значение и перспективы метода [ править | править код ]

Метод имеет решающее значение в ранней диагностике и лечении онкологических заболеваний (иммуногистохимия, онкогематология), диагностике инфекционных заболеваний (например определение CD4+ клеток при ВИЧ) и наследственных синдромов. Интенсивно развиваются автоматизированные методы, среди которых направления высокоинформативной микроскопии (high content imaging) и высокоинформативной цитометрии(high content cytometry),параллельно развивающиеся с 90х годов комбинированные методики цитометрии-микроскопии (цитометр-микроскоп), а также методы микрочиповой цитометрии с плазмонной голографией [3] в которых отдельные антитела метятся наночастицами.

Реакция иммунофлюоресценции (РИФ)

Реакция иммунофлюоресценции — РИФ (метод Кунса). Различают три разновидности метода прямой, непрямой, с комплементом. Реакция Кунса является методом экспресс-диагностики для выявления антигенов микробов или определения антител.
Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета.
Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген — антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.

Читайте также:  Какие документы нужны на прием к гинекологу

Стоимость венерологических анализов

Что такое РИФ анализ

К самому высокочувствительному способу диагностики сифилиса относят анализ РИФ, который представляет собой реакцию иммунофлюоресценции на определение антител к бледной трепонеме. С его помощью выявляются скрытые формы сифилиса даже без клинических проявлений.

РИФ анализ крови на сифилис используют для проверки уже полученных ложноположительных и положительных результатов.

Виды РИФ

РИФ анализ на сифилис основан на подсвечивании отмеченных антител, которые присоединяются к комплектам антигенов и антител под кварцевой лампой.

Исследование делится на следующие группы:

РИФ-10

РИФ-10 считается наиболее чувствительным методом. Остальные модификации относят к специфичным. Реакция иммунофлуоресценции в разведении 10 раз состоит из 2 фаз. В первой фазе к АГ присоединяют кровь больного. После образования компонента АГ-АТ происходит идентификация при помощи микроскопии. Далее наблюдают за процессом свечения. Если оно отсутствует, значит специфические АТ отсутствуют.

РИФ-200

РИФ-200 используют для диагностирования сифилиса в разных формах проявления. Особенно данный анализ ценен при выявлении скрытого сифилиса и перепроверки уже полученных положительных проб.

РИФ-абс

РИФ-абс раньше других реакций показывает положительные результаты. Поэтому его назначают лицам, которые имели контакты с инфицированными больными. Также данный метод целесообразен при форме сифилиса с малым процентом противотрепонемных антител в крови.

Показания для выполнения РИФ анализа на сифилис

РИФ анализ крови на сифилис имеет ряд показаний к выполнению. Основными показаниями являются:

  • если получены положительные результаты лабораторных исследований;
  • выявление скрытой инфекции;
  • подтверждение эффективности лечения.

Также сдать анализ РИФ на сифилис рекомендуется при следующих факторах:

  • беременным с положительным результатом НТТ (нетрепонемный тест), даже если отсутствуют клинические признаки;
  • лицам, имеющим соматические и инфекционные болезни, анализ которых показал положительным НТТ;
  • пациентам с признаками и симптомами сифилиса, но с отрицательным результатом НТТ;
  • выявление сифилиса на ранней стадии развития.
Читайте также:  Месячные идут 15 дней в чем причина

Реакция иммунофлуоресценции в обязательном порядке назначается для следующих лиц:

  • беременным перед поступлением в родильное отделение;
  • людям, сдающим донорскую кровь;
  • перед операционным вмешательством;
  • работникам в медицинских, образовательных, пищевых сферах.

Подготовка к анализу

Точность результата напрямую зависит от уровня подготовки к анализу. Поэтому подготовку лучше начать за 2 дня перед процедурой.

Надо придерживаться следующих правил:

  • кровь сдаётся только натощак в утренние часы, поэтому накануне вечером лучше ограничиться лёгким ужином, а утром не завтракать;
  • запрещается употребление алкогольных напитков, желательно не курить хотя бы перед анализом;
  • исключить жирную, острую, солёную пищу, утром лучше пить только воду.

Материалом для анализа РИФ на сифилис служит кровь. Берётся она из вены. Если вены «спрятаны», то кровь берётся из вен на наружной части кисти.

Расшифровка

Лабораторная диагностика использует сразу несколько тестов на сифилис для получения максимально точного результата. Это занимает больше времени, но зато даёт наиболее точный ответ.

Чаще всего результат анализа РИФ представляют цифрами. Расшифровка имеет следующие обозначения:

  • резко положительный результат обозначается 4 плюсами (++++);
  • положительный результат обозначается 3 плюсами (+++);
  • слабоположительный результат 2 плюсами (++);
  • сомнительный результат 1 плюс (+);
  • отрицательный результат обозначается 1 минусом (-).

Результат РИФ на сифилис также представляется в процентном варианте, который зависит от количественного показателя связанных бактерий:

  • при отрицательном результате иммобилизация до 20%;
  • при слабоположительном результате иммобилизация варьирует от 20 до 50%;
  • при положительном результате иммобилизация выше 50%.

Если результат выдал положительный ответ, то это констатирует наличие заболевания.

Если результат слабоположительный, то это указывает на единичное количество остаточных антител в крови.

Отрицательный результат говорит об отсутствии бледной трепонемы, а это означает, что пациент здоров.

Опытные врачи нашей клиники проведут диагностику сифилиса быстро и с высокой точностью показаний. Мы социально ориентированы на все слои населения, поэтому стоимость анализа РИФ недорогая. Цена представлена в таблице на нашем сайте.

Комментировать
10 просмотров
Комментариев нет, будьте первым кто его оставит

Это интересно
No Image Венерология
0 комментариев
No Image Венерология
0 комментариев
No Image Венерология
0 комментариев
No Image Венерология
0 комментариев
Adblock detector