No Image

Рск анализ крови что это

СОДЕРЖАНИЕ
4 просмотров
17 ноября 2019

РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РСК) И РЕАКЦИЯ ДЛИТЕЛЬНОГО СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА (РДСК)

РЕАКЦИЯ СВЯЗЫВАНИЯ КОМПЛЕМЕНТА, РСК, реакция Борде — Жангу [по имени бактериологов Ж. Борде (J. Bordet) и О. Жангу (О. Gengou), 1901], высокоспецифичная и очень чувствительная серологич. реакция, основанная на свойстве комплекса антиген — антитело фиксировать свободный комплемент.

Комплемент (система комплемента) (от лат.complementum — дополнение), группа глобулярных белков сыворотки крови животных и человека, представляющих собой часть иммунной системы организма. При попадании в организм инфицирующих его бактерий или вирусов, некоторых токсинов или возникновении собственных трансформированных клеток происходит активация комплемента, в результате чего клетки-мишени лизируются (разрушаются), а токсины и вирусы нейтрализуются. Поэтому систему комплементов рассматривают наряду с макрофагами как передовой рубеж иммунной защиты организма.

Эту реакцию широко применяют при идентификации антигенов и в серодиагностике инфекций, особенно заболеваний, вызванных спирохетами (реакция Вассермана), риккетсиями и вирусами.

РСК — сложная серологическая реакция. В ней участвуют комплемент и две системы антиген — антитело. По существу, это две серологические реакции.

Первая система — основная состоит из антигена и антитела (один известный, другой нет). К ней добавляют определенное количество комплемента. При соответствии антигена и антитела этой системы они соединятся и свяжут комплемент. Образовавшийся комплекс мелкодисперсный и не виден.

связывание комплемент реакция серодиагностика

Об образовании этого комплекса узнают с помощью второй системы гемолитической или индикаторной. В нее входят эритроциты барана (антиген) и соответствующая им гемолитическая сыворотка (антитело), т.е. готовый иммунный комплекс. В этой системе лизис эритроцитов может произойти только в присутствии комплемента. Если комплемент связан первой системой (при соответствии в ней антигена и антитела), то во второй системе гемолиза не будет — так как нет свободного комплемента. Отсутствие гемолиза (содержимое пробирки мутное или на дне ее Осадок эритроцитов) регистрируют как положительный результат РСК.

Если в первой системе антиген не соответствует антителу, то иммунный комплекс не образуется и комплемент останется свободным. Оставшийся свободным, комплемент участвует во второй системе, вызывая гемолиз, — результат РСК отрицательный (содержимое пробирок прозрачно — "лаковая кровь").

Компоненты реакции связывания комплемента:

1. Антиген — обычно лизат, экстракт, гаптен; реже взвесь микроорганизмов

2. Антитело — сыворотка больного

3. Комплемент — сыворотка морских свинок

4. Антиген — эритроциты барана Гемолитическая система

5. Антитело — гемолизин к эритроцитам барана

6. Изотонический раствор

1. Сыворотку разводят в 3 раза меньше ее титра. Готовят общее разведение сыворотки для всего опыта, объем которого определяют, умножив объем сыворотки в одной пробирке (например, 0,5 мл) на число пробирок, немного превышающее число их в опыте. Избыток жидкости необходим при приготовлении всех компонентов реакции: часть ее остается на стенках пробирок, колб, пипеток. Объемы разведенного гемолизина и взвеси эритроцитов, приливая сыворотку к эритроцитам, тщательно перемешивают и инкубируют 30 мин при 37°С (сенсибилизируют).

2. Эритроциты барана. Готовят 3% взвесь отмытых эритроцитов барана на все количество пробирок в опыте. Для приготовления гемолитической системы за 30 мин до внесения ее в опыт смешивают равные объемы эритроцитов барана с антителом к ним.

3. Комплемент обычно разводят 1: 10. Перед каждым опытом его обязательно титруют. Титр комплемента — это его наименьшее количество, при добавлении которого к гемолитической системе происходит полный гемолиз в течение 1 ч при 37°С.

4. Антиген обычно получают готовым с указанием его титра, т.е. того количества, которое после разведения антигена должно содержаться в 1 мл. Например, при титре 0,4 его разводят в 0,96 мл изотонического раствора. В опыт берут количество антигена, равное половине титра (0,5 мл). Это его рабочая доза. Готовят общее разведение антигена для всего опыта, умножая 0,5 мл на число пробирок в опыте.

5. Антитело — сыворотка больного. Свежую сыворотку перед опытом инактивируют, чтобы разрушить имеющийся в ней комплемент. Для этого ее прогревают 30 мин при 56°С на водяной бане или в инактиваторе с терморегулятором. Последний способ предпочтительнее: он исключает возможность перегрева

Постановка реакции связывания комплемента (РСК).

Реакцию ставят в объеме 1 куб. см (по 0,2 куб. см каждого компонента).

Испытуемые сыворотки исследуют в разведении 1: 5 и 1: 10 (доза сыворотки 0,04 куб. см и 0,02 куб. см со специфическим антигеном, в разведении 1: 5 с контрольным антигеном (на специфичность) и без антигена (на антикомплементарность).

Испытуемые и контрольные сыворотки инактивируют в день постановки реакции в разведенном виде при 56-65°С (в зависимости от вида животных) в течение 30 мин. (также в РДСК).

Читайте также:  Анализ крови на вич сроки готовности

Оба этапа реакции проводят в водяной бане при 37-38°С, бактериолитическую систему выдерживают 60 мин, второй этап реакции (с гемолитической системой) — 20 мин.

Контроли главного опыта РСК:

позитивная сыворотка в разведении 1: 5 без антигена и с контрольным антигеном; в разведениях от 1: 5 до ее титра со специфическим антигеном;

негативная сыворотка в разведениях 1: 5 и 1: 10 со специфическим антигеном, в разведении 1: 5 с контрольным антигеном и без антигена — антигены специфический и контрольный в двойной дозе — на антикомплементарность (комплемент +) и на гемотоксичность (комплемент);

гемолитическая система на гемотоксичность (комплемент).

Учет результатов. В контролях не должно быть даже следов гемолиза, так как в одном из них нет комплемента, в другом — гемолизина. Контроли свидетельствуют об отсутствии у компонентов реакции гемотоксичности (способности спонтанно лизировать эритроциты).

В опыте активность комплемента может снизиться за счет неспецифической адсорбции его другими компонентами реакции, поэтому для опыта количество комплемента увеличивают: берут следующую за титром дозу. Это — рабочая доза.

Существуют различные варианты постановки РСК: классич. метод постановки в виде макро — и микровариантов, реакция длительного связывания комплемента (РДСК) на холоде, метод количеств. РСК по 50 % -ному гемолизу сенсибилизированных эритроцитов и др. Для диагностики ряда заболеваний применяют более чувствительный метод — РДСК.

Постановка реакции длительного связывания комплемента (РДСК).

Первую фазу реакции проводят в холодильнике при 2-6°С в течение 16-18 час., вторую фазу в водяной бане 20 мин при 37-38°С.

Комплемент применяют в рабочем разведении 1: 25 или 1: 30 (при определении его рабочего разведения).

В первый день разливают сыворотки и антиген для главного опыта. Реакцию ставят в объеме 1 куб. см (по 0,2 куб. см каждого компонента). Контроли РДСК такие же как при постановке РСК.

Затем во все пробирки главного опыта и соответствующих контролей разливают комплемент по 0,2 куб. см в зависимости от его рабочего разведения, пробирки встряхивают и помещают в холодильник на 16-18 час. при 2-6°С.

На следующий день штативы с первой фазой вынимают из холодильника и после выдерживания в течение 20-30 мин. при комнатной температуре во все пробирки разливают гемолитическую систему в дозе (в приведенном примере — 0,6 куб. см). Штативы встряхивают и помещают в водяную баню на 20 мин. при 37-38°С.

Схема главного опыта РДСК представлена в таблице 3.

Учет результатов РСК, РДСК проводят дважды: первый раз — сразу после водяной бани, второй — после оседания эритроцитов на дно пробирки (через 3-4 часа после водяной бани) или на следующий день при хранении в холодильнике от 2° до 6°С.

Для объективного определения результатов реакции оценку рекомендуется проводить в процентах гемолиза. Для этого из реакции выбирают 5 пробирок с полным (100%) гемолизом и жидкость из них сливают в одну пробирку. Из нее готовят разведения с меньшим процентом гемолиза так называемую "Стандартную " шкалу.

Степень гемолиза в пробирках с исследуемыми сыворотками определяют путем сравнения со степенью гемолиза в "стандартных" пробирках и процент гемолиза выражают в крестах.

Степень задержки обратно пропорциональна проценту гемолиза эритроцитов:

++++ (4 креста) — отсутствие гемолиза, надосадочная жидкость прозрачная, бесцветная;

+++ (3 креста) — гемолиз 25 % эритроцитов;

++ (2 креста) — гемолиз 50% эритроцитов;

+ (1 крест) — гемолиз 75% эритроцитов;

(минус) — полный гемолиз эритроцитов, осадок отсутствует, жидкость интенсивно окрашена гемоглобином.

Оценка результатов РСК, РДСК.

Оценивают испытуемые сыворотки в разведениях 1: 5 и 1: 10 (0,04 куб. см, 0,02 куб. см) при полном гемолизе эритроцитов в контроле сыворотки без антигена и с контрольным антигеном.

Положительной оценивают реакцию при задержке гемолиза эритроцитов на 3-4 креста в разведении 1: 10.

Сомнительной — при задержке гемолиза эритроцитов на 1 крест в разведении сыворотки 1: 10 и от 2 до 4 крестов в разведении 1: 5.

Отрицательной — при полном гемолизе эритроцитов в разведениях сыворотки 1: 5и 1: 10.

Анализы крови

Общее описание

Реакция Вассермана (RW) — это самая популярная иммунологическая реакция, применяемая для диагностики сифилиса, начиная со времени своего открытия в 1906 году. RW относится к группе реакций связывания комплемента (РСК) и основывается на способности сыворотки крови больного сифилисом образовывать комплекс с соответствующими антигенами. Современные методики РСК, применяемые для диагностики сифилиса, значительно отличаются по своим антигенам от классической реакции Вассермана, однако, термин «реакция Вассермана» за ними традиционно сохраняется.

В крови заразившегося человека появляются антитела, выработанные иммунной системой. В возбудителе заболевания — бледной трепонеме (Treponema pallidum), содержится антиген кардиолипин, который вызывает выработку антител, определяемых с помощью RW. Положительная реакция Вассермана как раз и свидетельствует о присутствии таких антител в крови человека и на этом основании делается вывод о наличии заболевания.

Читайте также:  Почему перед месячными болят колени

Показателем результата исследования в РСК служит реакция гемолиза. В реакции участвуют два компонента: эритроциты барана и гемолитическая сыворотка. Гемолитическую сыворотку получают путем иммунизации кролика эритроцитами барана. Её инактивируют в течение 30 минут при температуре 56°С. Результаты РСК оценивают в зависимости от наличия или отсутствия гемолиза в опытных пробирках. Наличие гемолиза объясняется тем, что если в испытуемой сыворотке отсутствуют сифилитические антитела, то реакция антиген-антитело не происходит, и весь комплемент идет на реакцию бараньи эритроциты-гемолизин. А если имеются специфические антитела, комплемент полностью уходит на реакцию антиген-антитело и гемолиза не происходит.

Все ингредиенты для реакции Вассермана берутся в одинаковом объеме — 0,5 или 0,25 мл. Для прочной фиксации комплемента на специфическом комплексе, смесь исследуемой сыворотки, антигена и комплемента помещают в термостат при температуре 37° на 45-60 мин. (I фаза реакции), после чего вносят гемолитическую систему, состоящую из бараньих эритроцитов и гемолитической сыворотки (II фаза реакции). Далее пробирки вновь помещают в термостат на 30-60 минут до наступления гемолиза в контроле, в котором антиген заменяют физиологическим раствором, а вместо исследуемой сыворотки вносят физиологический раствор. Антигены для реакции Вассермана выпускают в готовом виде с указанием титра и способа разведения.

Максимальную позитивность реакции Вассермана принято обозначать количеством крестов: ++++ (резко положительная реакция) — свидетельствует о полной задержке гемолиза; +++ (положительная реакция) — соответствует значительной задержке гемолиза, ++ (слабоположительная реакция) — свидетельство частичной задержки гемолиза, + (сомнительная реакция) — соответствует о незначительной вдержке гемолиза. Отрицательная RW характеризуется полным гемолизом во всех пробирках опыта.

Однако, иногда возможны и ложноположительные результаты — это связано с тем, что кардиолипин в некотором количестве содержится и в клетках человеческого организма. Иммунная система человека не создает антител против «собственного» кардиолипина, но из этого правила бывают и исключения, благодаря которым положительная реакция Вассермана возникает у совершенно здорового человека. Особенно часто это наблюдается после перенесенных тяжелых вирусных и прочих заболеваний — пневмонии, малярии, болезней печени и крови, при беременности, т.е. в моменты серьезного ослабления иммунитета.

Если врач подозревает у пациента ложноположительный результат на реакцию Вассермана, то он может назначить ему ряд дополнительных исследований, которые обычно применяются при диагностике заболеваний, передающихся половым путем.

Заболевания и случаи, при которых врач может назначить анализ крови на RW

  • Сифилис.
  • Подозрение на сифилис у людей, находящихся в контакте с больными сифилисом.
  • Беременность.
  • Наркотическая зависимость.
  • Прерывание беременности.
  • Лихорадка, сопровождающаяся увеличением регионарных лимфатических узлов.
  • Первичное посещение поликлиники.
  • Поступление в стационар на лечение.
  • Лечение в психиатрическом или неврологическом стационаре.
  • Донорство крови, тканей, спермы, других секретов организма.
  • Работа в сфере услуг, торговли, медицинского обслуживания, социальной и образовательной сферах.

Проведение процедуры сдачи анализа крови на RW

Кровь на RW сдается только натощак. Крайний прием пищи должен быть не позднее 6 часов до сдачи анализа. Медицинский работник усаживает пациента или укладывает на кушетку и осуществляет забор 8-10 мл крови из локтевой вены.

Если анализ необходимо сделать младенцу, то забор осуществляется из черепной или яремной вены.

Подготовка с сдаче анализа крови на RW

За 1—2 суток до сдачи анализа следует прекратить употребление спиртных напитков. Также не рекомендуется есть жирную пищу — она может исказить результат. В период подготовки к анализу следует воздержаться от приема препаратов наперстянки.

Противопоказания

Результат анализа будет ложным, если:

  • у пациента повышена температура тела,
  • человек болен инфекционным заболеванием или только переболел им,
  • у женщины период менструации,
  • беременная в последние недели перед родами,
  • первые 10 дней после родов,
  • первые 10 дней жизни младенца.

Расшифровка результатов анализа

При первичном сифилисе реакция Вассермана становится положительной на 6-8 неделе течения заболевания (в 90 % случаев), при этом отмечается следующая динамика:

  • в первые 15-17 дней после заражения реакция у большинства больных, как правило, отрицательная;
  • на 5-6-й неделе заболевания примерно у 1/4 части больных реакция становится положительной;
  • на 7-8-й неделе заболевания RW становится положительной у большинства.

При вторичном сифилисе RW положительна всегда. Вместе с другими серологическими реакциями (РПГА, ИФА, РИФ) позволяет не только выявить наличие возбудителя, но и выяснить приблизительный срок заражения.

При развитии сифилитической инфекции на 4-й неделе заболевания, после возникновения первичной сифиломы, реакция Вассермана переходит из отрицательной в положительную, оставаясь таковой и во вторичном свежем, и во вторичном рецидивном периоде сифилиса. В скрытом вторичном периоде и без лечения RW может переходить в отрицательную с тем, чтобы при наступлении клинического рецидива сифилиса вновь стать положительной. Поэтому, в скрытом периоде сифилиса отрицательная реакция Вассермана не свидетельствует о его отсутствии либо излеченности, а лишь служит благоприятным прогностическим симптомом.

Читайте также:  Атрепьев юрий анатольевич

При активных поражениях третичного периода сифилиса положительная RW встречается приблизительно в 3/4 случаев заболевания. Когда же активные проявления третичного периода сифилиса исчезают, она часто переходит в отрицательную. В этом случае отрицательная реакция Вассермана у больных не свидетельствует о том, что у них нет сифилитической инфекции.

При раннем врожденном сифилисе RW практически во всех случаях положительна и является ценным методом для верификации болезни. При позднем врожденном сифилисе результаты ее соответствуют таковым, полученным в третичном периоде приобретенного сифилиса.

Большое практическое значение имеет исследование реакции Вассермана в крови у больных сифилисом, подвергающихся лечению. У некоторых больных, несмотря на энергичную противосифилитическую терапию, реакция Вассермана не переходит в отрицательную — это так называемый серорезистентиый сифилис. В данном случае проводить бесконечно противосифилитическую терапию, добиваясь перехода положительной RW в отрицательную, не имеет смысла.

Из изложенного выше следует, что отрицательная реакция Вассермана, не всегда является признаком отсутствия сифилитической инфекции в организме.

Возможна положительная реакция Вассермана у людей при ряде других, не связанных с сифилисом заболеваниях и состояниях: туберкулёзе, системной красной волчанке, заболеваниях крови (лейкемиях), проказе, пемфигусе, лептоспирозе, злокачественных новообразованиях, тифах, скарлатине, болезни бери-бери, сонной болезни, во время беременности, перед родами или после них, менструации, после наркоза, после употребления спиртных напитков, у лиц, злоупотребляющих наркотиками, приёма жирной пищи, лекарств, введения чужеродных сывороток. В таких случаях для уточнения диагноза используются другие методы (РПГА, ИФА, РИФ). Очень характерна неспецифическая положительная реакция Вассермана при малярии, особенно в приступный период. Поэтому если RW положительна у человека без клинических проявлений сифилиса и отрицающего у себя сифилитическую инфекцию, следует подумать о малярии.

Всё перечисленное свидетельствует о том, что положительный результат реакции Вассермана, еще не является безусловным доказательством наличия сифилитической инфекции.

Восстановление после сдачи анализа

После сдачи анализа крови врачи рекомендуют правильное и сбалансированное питание, а также как можно больше жидкости. Можно позволить себе теплый чай и шоколад. Будет полезным воздержаться от физических нагрузок и ни в коем случае не принимать алкоголь.

Нормы

В норме в крови должен наблюдаться гемолиз — это считается отрицательной реакцией на сифилис (Реакция Вассермана отрицательная). Если же гемолиз отсутствует, оценивается степень реакции, которая зависит от стадии заболевания (помечается знаками «+»). При этом следует знать, что у 3-5% совершенно здоровых людей реакция может быть ложноположительной. В то же время, в первые 15-17 дней после заражения, реакция у больных людей может быть ложноотрицательной.

Заболевания, при которых врач может назначить анализ крови на сифилис (RW)

  • facebook
  • twitter
  • odnoklassniki
  • vkontakte
  • youtube
  • mail
  • Online диагноз
    © ООО «Интеллектуальные медицинские системы», 2012—2019 гг.
    Все права защищены. Информация сайта юридически защищена, копирование преследуется по закону.

    Размещение рекламы, сотрудничество: info@online-diagnos.ru

    Сайт не несет ответственность за содержание и достоверность размещенного пользователями на сайте контента, отзывы посетителей сайта. Материалы сайта носят исключительно информационно-ознакомительный характер. Содержание сайта не является заменой профессиональной консультации врача-специалиста, диагностики и/или лечения. Самолечение может быть опасно для здоровья!

    Реакция связывания комплемента (РСК)

    Реакция связывания комплемента (РСК) заключается в том, что при соответствии друг другу антигенов и антител они образуют иммунный комплекс, к которому через Fc-фрагмент антител присоединяется комплемент (С), те происходит связывание комплемента комплексом антиген — антитело. Если же комплекс антиген — антитело не образуется, то комплемент остается свободным. PCK проводят в две фазы 1-я фаза — инкубация смеси, содержащей антиген + антитело + комплемент, 2-я фаза (индикаторная) — выявление в смеси свободного комплемента путем добавления к ней гемолитической системы, состоящей из эритроцитов барана, и гемолитической сыворотки, содержащей антитела к ним. В 1-й фазе реакции при образовании комплекса антиген — антитело происходит связывание им комплемента, и тогда во 2-й фазе гемолиз сенсибилизированных антителами эритроцитов не произойдет (реакция положительная). Если антиген и антитело не соответствуют друг другу (в исследуемом образце нет антигена или антитела), комплемент остается свободным и во 2-й фазе присоединится к комплексу эритроцит — антиэритроцитарное антитело, вызывая гемолиз (реакция отрицательная).

    Комментировать
    4 просмотров
    Комментариев нет, будьте первым кто его оставит

    Это интересно
    No Image Венерология
    0 комментариев
    No Image Венерология
    0 комментариев
    No Image Венерология
    0 комментариев
    No Image Венерология
    0 комментариев
    Adblock detector